ABSTRACT
Se determinó el serotipo, susceptibilidad a los antimicrobianos y la relación de severidad de la infección con el serotipo, a un grupo de 50 cepas de S. flexneri aisladas de niños menores de 5 años con diarrea: 25 niños deshidratados y 25 no deshidratados. Para la tipificación se utilizaron antisueros comerciales y la susceptibilidad a los antimicrobianos se realizó por el método de difusión en disco. Características epidemiológicas y clínicas de los episodios: media de edad 13,32 meses ± 12, clase obrera y marginal 94% (P< 0,05), eutróficos 80% (P<0,05), sangre macroscópica en heces 82% (P< 0,05), vómitos 60% (P> 0,05). El serotipo con mayor frecuencia fue el 2a (40%), seguido por el 3a (24%), 2b (18%), 1a (6%), 6 (4%), 3b (2%), 4a (2%), variante X (2%) y variante Y (2%). El mayor porcentaje de resistencia se observó a tetraciclina (96%), seguido por ampicilina (94%), cloranfenicol (90%), amoxicilina ácido clavulánico (84%) y trimetoprin-sulfametoxazol (72%). La desnutrición (36%, P< 0,05) y el serotipo 2a (56%, P< 0,05) se observaron con mayor frecuencia en los niños deshidratados, mientras que el serotipo 2b predominó en los no deshidratados (32%, P< 0,05). La prevalencia del serotipo 2a, su asociación con la severidad del episodio y la elevada resistencia a los antibióticos alertan sobre la problemática de la infección por Shigella en el país y refuerza la necesidad de estudios para ajustar pautas en el tratamiento.
Serotype, antimicrobial susceptibility, and severity of the infection according to serotype, were determined in a group of 50 Shigella flexneri strains isolated from children less than 5 years old with diarrhea: 25 children dehydrated and 25 non dehydrated. Commercial antisera were used for serotyping and antimicrobial susceptibility was determined by the disc diffusion method. Clinical and epidemiological characteristics of the episodes: mean age 13.22 ± 12 months; 94% belonged to laborer and marginal classes (P<0.05); 80% eutrophic (P<0.05); 82% macroscopic blood in feces (P<0.05); 60% vomits (P>0.05). The most frequent serotype was 2a (40%), followed by 3a (24%), 2b (18%), 1a (6%), 6 (4%), 3b (2%), 4a (2%), variant X (2%) and variant Y (2%). The highest resistance percent was found for tetracycline (96%), followed by ampicylline (94%), chloramphenicol (90%), amoxicylline clavulonic acid (84%) and trimetoprim-sulfametoxazol (72%). Malnourishment (32%, P<0.05) and serotype 2a (56%, P<0.05) were seen more frequently in dehydrated children, while serotype 2b predominated in non dehydrated children (32%, P<0.05). Prevalence of serotype 2a and its association with the severity of the episode and high antibiotic resistance alert regarding the problem of Shigella infections in our country and reinforce the need of further studies to adjust treatment norms.
ABSTRACT
La vaginitis es un diagnóstico común en ginecología. Su presencia obedece a diversas causas, algunas aún desconocidas. Bacteroides fragilis es el anaerobio más importante desde el punto de vista clínico. Entre otros factores de virulencia, algunas cepas producen una enterotoxina asociada con diarrea. Estas cepas han sido aisladas tanto de muestras intestinales como extra intestinales. Por la existencia de procesos inflamatorios en la mucosa cérvico-vaginal de etiología desconocida se investiga a B. fragilis enterotoxigénico en pacientes con vaginitis. Se procesaron 140 muestras de pacientes y 40 de controles sanos. De las pacientes sintomáticas se aislaron 15 cepas de B. fragilis y ninguna en los controles (P<0,05). Posteriormente, fueron cultivadas en anaerobiosis, usando caldo cerebro-corazón suplementado con vitamina K1 y hemina durante 48 horas a 36°C. El sobrenadante se obtuvo por centrifugación y su actividad se ensayó en células HT-29. Doce (80%) cepas produjeron alteraciones en la monocapa celular, manifestada por desprendimiento, disolución de los acúmulos, expansión y disgregación de las células, superando en algunos casos la toxicidad observada en el control positivo. En siete pacientes, B. fragilis enterotoxigénico no estuvo asociado a patógenos específicos. La presencia de B. fragilis enterotoxigénico en pacientes con vaginitis plantea la necesidad de definir su papel en la etiología de esta entidad clínica.
Vaginitis is a common diagnosis in the centers of gynecological attention. It is due to several causes, some even unknown. Bacteroides fragilis is the most important anaerobe in clinical practice; some strains produce an enterotoxin associated with diarrhea. Enterotoxigenic B. fragilis has been isolated from intestinal as well as extra intestinal samples. Because inflammatory processes unknown etiology it was investigated B. fragilis in the cervical-vaginal mucous in the patients with vaginitis. 140 samples were processed from symptomatic patients and 40 from healthy controls. 15 strains of B. fragilis were isolated from symptomatic patients while none were found in controls (P<0,05). These strains were cultivated in anaerobic chambers, cultured in brain heart infusion supplemented with vitamin K1 and hemine during 48 hours at 36°C. Supernatant were obtained by centrifugation and its activity assayed in HT-29 cells. Twelve (80%) of the isolated induced alterations in target cell morphology characterized by cell detachment, breakup of cell clumps, expansion and degradation of cells, some cases revealed a higher cytotoxic activity than the positive control. In seven patients enterotoxigenic B. fragilis was not associated to specific pathogens. The presence of enterotoxigenic B. fragilis in patients with vaginitis raises the necessity to define its role in the etiology of this clinical entity.
ABSTRACT
The aim of this study was to evaluate the acute cell injury of excretion products present in culture filtrate from Shigella dysenteriae in both whole lower limb of chick embryo ex vivo and myoblasts cells developed in hanging-drop cultures in vitro. Three controls were defined: a) Tyrode's solution b) brain-heart broth infusion (CCC) and c) supernatant not toxigenic of E.coli 0157:H7. Shigella dysenteriae were culture for 24 hours and the excretion products were obtained after centrifugation of the culture. After lh of treatment, the morphologic changes in limbs treated with raw filtrate were evaluated through histopathological examination of sections stained with hematoxylin-eosin (H&E-stain) and Gomori's trichrome by image analysis techniques. Quantification of apoptotic cells was measured by an enzyme-linked immunoassay TUNEL. The morphological feature of apoptosis were evaluated in culture myoblasts. In contrast with controls, the longitudinal section on treated thigh of chick embryo limb-buds show atrophy muscle tissue, detachment of few fibers, 57,14% decrease in the number of cells, and loss of collagen substrate. Apoptotic index percent increase and mitotic index decrease in response to excretion products were observed, but were not significant. Membrane blebbing, vacuolation, small aggregates of chromatin around the nucleus and loss of cell adhesion were observed. Culture filtrate from Shigella dysenteriae produced cytotoxic effect on cell of muscle fibers with acute cell injuries suspected to be related to the apoptotic cell death.
El objetivo del presente trabajo ha sido evaluar el daño celular agudo generado por el producto de excreción de Shigella dysentenae sobre el tejido muscular del miembro inferior de embrión de pollo, así como sobre los mioblastos obtenidos a partir del cultivo de explantes de tejido muscular desarrollado en gota pendiente. Tres controles fueron definidos: a) solución de tiroide b) caldo de infusión cerebro-corazón (CCC), c) producto de excreción bacteriano no toxigénico de E. coli 0157:H7. El producto de excreción fue obtenido a partir de la centrifugación y filtrado del medio de cultivo de Shigella dysentenae con 24 horas de crecimiento. Luego de una hora de tratamiento, los cambios morfológicos del tejido muscular fueron evaluados a través del examen histopatológico, con técnicas de análisis de imágenes sobre cortes teñidos con hematoxilina-eosina (H&E) y Tricrómico de Gomori. El ensayo enzimático TÚNEL fue utilizado para evaluar el índice de apoptosis. Señales morfológicas de muerte celular fueron evaluadas en mioblastos en cultivo En contraste con los controles, el tejido muscular presentó signos de atrofia, con fibras desconectadas y pérdida del 57,14% del número total de células así como pérdida de la matriz de colágeno. Un incremento en el índice apoptótico y una reducción de índice mitótico fueron registrados. Esto último fue no significativo. Los mioblastos en cultivo presentaron signos morfológicos de apoptosis tales como protuberancias en la membrana, vacuolización, agregación de cromatina alrededor del núcleo y pérdida de la adhesión celular. Se concluye que el producto de excreción afecta al tejido muscular esquelético del miembro inferior de embrión de pollo e induce lesiones de toxicidad relacionadas con la muerte celular por apoptosis.
Subject(s)
Animals , Chick Embryo , Shigella dysenteriae , Apoptosis , Muscle, Skeletal/pathology , Shiga Toxin , In Vitro Techniques , Cell Death , Myoblasts , Dysentery, BacillaryABSTRACT
El objetivo de éste estudio fue caracterizar histológica y morfométricamente alteraciones "ex vivo" e "en vitro" del tejido hepático de embrión de pollo causadas por el producto de excreción de Shigella dysenteriae. El tejido hepático de embrión de pollo de 8 días de desarrollo, "ex vivo", y las células hepáticas cultivadas por la técnica de gota pendiente, "in vitro", fueron utilizados. Ambos sistemas fueron sumergidos en el producto de excreción obtenido a partir del sobrenadante del cultivo de la cepa Shigella dysenteriae tipo I. Tres controles fueron definidos: a) solución Tyrode, b) caldo de infusión de cerebro-corazón (CCC), c) producto de excreción no toxigénico de la bacteria E. coli O157:H7. Después de una hora de tratamiento los tejidos y las células fueron fijadas en formol zinc. Los hallazgos histológicos fueron obtenidos en cortes teñidos con Hematoxilina Eosina y Von Koss . Para llevar a cabo el análisis morfométrico se hizo uso de técnicas de morfología microscópica de análisis de imágenes con el programa ImagenJ versión 1.36. El tejido hepático de embrión de pollo "ex vivo" tratado con el producto de excreción de Shigella dysenteriae mostró, respecto al control: la pérdida en el arreglo de las células endoteliales, núcleos con pérdida del contenido nuclear, espacios sinusoidales de mayor tamaño y presencia de fosfatos de calcio sobre la región de las células endoteliales que recubren a la vena central. Las células hepáticas tratadas "in vitro" mostraron: forma estrecha, abundancia de vesículas de lípidos de mayor tamaño, reducción significativa del número de pixels por área nuclear sobre la escala de grises entre 85 y 168 e incremento de la región de los blancos sobre las escala de grises 169-255, respecto al control CCC, evidenciado a través del histograma.
Subject(s)
Animals , Chick Embryo , Shigella dysenteriae , Medicine , Venezuela , Veterinary MedicineABSTRACT
La capacidad de adherencia y citotoxicidad de cepas de Klebsiella pneumoniae y Klebsiella oxytoca sobre líneas celulares intestinales HT-29 y CaCo-2, fue medida a partir de cepas aisladas de heces de niños de 0 a 5 años cuyas principales características son la pobreza y desnutrición, los cuales son factores importantes en problemas de salud publica en Venezuela. Cinco de las seis cepas estudiadas son adherentes y citotóxicas para ambas líneas celulares. Estos resultados confirman que las cepas de K. pneumoniae y K. oxytoca presentan dos mecanismos de enteropatogenicidad: uno de adherencia específico y otro de citotoxicidad en líneas celulares intestinales HT-29 y CaCo-2.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Infant , Child, Preschool , Diarrhea , Klebsiella pneumoniae , Public Health , Tissue Adhesions , Microbiology , Pediatrics , VenezuelaABSTRACT
La importancia de los rotavirus en la diarrea aguda infantil ha sido bien demostrada. En consecuencia, numerosos esfuerzos han sido dirigidos para desarrollar una vacuna para su prevención. En Venezuela entre 1985 y 1989, se han evaluado 3 diferentes estrategias de vacuna contra los Rotavirus. La primera consistió en la utilización de una cepa de mono (RRV-serotipo 3) cuyos estudios demostraron que esta vacuna a la dosis de 10E4 UFP era inocua, inmunogénica y fundamentalmente era capaz de inducir protección homotípica. Debido a que existen 4 serotipos de Rotavirus epidemiológicamente importantes se decidió evaluar una nueva estrategia que consistió en un virus híbrido o "Reassortant" que tiene 10 genes de la cepa de mono y 1 gen de origen humano el cual le confirió el serotipo. Primero se evaluaron los "Reassortants" (serotipo 1, 2 y 4) administrados individualmente y luego mezclados en vacunas Bivalentes (serotipo 1 y 3) y Cuadrivalentes (serotipo 1, 2, 3 y 4). Estos estudios demostraron que los "Reassortants" eran inocuos en ambos casos, pero aparentemente la inmunogenicidad disminuyó al ser mezcladas las cuatro cepas en la vacuna Cuadrivalente (dosis 10E4 UFP) a causa de la interferencia viral que se produjo entre ellos. Cuando se incrementó la dosis de la Cuadrivalente se encontró que la inducción de serorespuesta aumentó aunque todavia no llegó a los niveles esperados. En consecuencia se comenzó a probar una tercera estrategia que consistió en una cepa de neonato M37, la cual ofrece ventajas con respecto a las anteriores por ser de origen humano. Aunque la dosis 10E4 UFG fue inocua, sin embargo, la inducción de serorespuesta no fue muy diferente a los niveles alcanzados por la Cuadrivalente, por lo cual en estos momentos se esta evaluando la dosis 10E5 UFP de la cepa M37. Hasta el momento se necesitan realizar otros estudios que incluyan la eficacia de la vacuna Cuadrivalente y la M37 para observar si existe alguna correlación entre protección y serorespuesta, hecho que todavía no ha sido dilucidado en el desarrollo de la vacuna anti-rotavirus
Subject(s)
Infant , Humans , Male , Female , Diarrhea/etiology , Rotavirus/etiology , Viral Vaccines/therapyABSTRACT
Con el objetivo de estudiar la presencia de posibles asociaciones entre enteroxigenicidad y otras características patógenas medidas por plásmidos cmo son resistencia a los antibióticos, producción de colicinas (Col V), hemolisinas (Hly) y factores de colonización (CFA/1), se analizaron 38 cepas de Escherichia coli enterotoxigénicas (ETEC) aisladas de niños con diarrea aguda. El 84% de las cepas enterotoxigénicas fueron multiresistentes. Veinte cepas (52,63%) fueron capaces de transferir una o más de las características estudiadas y 92,68% de las transcojugantes fueron mutiresistentes. Se encontró una baja frecuencia en la transferencia simultánea de ST y Col V, Hly o CEA/I (1,82%). El análisis de plásmidos reveló la presencia de una población heterogénea de plásmidios asociados a toxigenicidad. Se encontró un plásmido de aproximadamente 31 megadaltons (Md) de peso molecular que codifica pra ST y reistencia para ampicilina, Kanamicina y estreptomicina. Sin embargo este plásmidio no se encontró en todas las cepas. Estos resultados muestran la existencia de una población heterogénea de plásmidos que codifican para la producción de enterotoxinas, esta diversidad probablemente sea una consecuencia del uso indiscriminado de antibióticos y de los mecanismos moleculares de transposición de ST y resistencia a drogas en la evolución de estas enterobacterias